网站建设中 html5,惠民县建设局网站,wordpress未收到验证,昆明软讯科技网站建设俗话说#xff0c;一个生物学博士#xff0c;要跑满1000面胶才能毕业。今天特邀实验室博三大师兄#xff0c;和大家聊一聊WB内参那些小事。选择好合适并且好跑的内参#xff0c;WB实验也就成功了一半。1. 什么是内参#xff1f;内参即内部参照#xff0c;一般是指由管家基…俗话说一个生物学博士要跑满1000面胶才能毕业。今天特邀实验室博三大师兄和大家聊一聊WB内参那些小事。选择好合适并且好跑的内参WB实验也就成功了一半。1. 什么是内参内参即内部参照一般是指由管家基因编码表达的蛋白它们在各组织和细胞中的表达相对恒定在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物2. 内参的作用是什么1校正蛋白样品定量以及上样过程中的误差保证实验结果的准确性2作为空白对照检测WB过程中蛋白转膜是否完全以及发光显色体系是否正常3. 如何选择内参1根据样本的种属来源选择如哺乳动物或者植物等2考虑目的蛋白的分子量大小一般需要与目的蛋白的分子量相差5kd以上3根据蛋白表达位置选择不同的内参不同的细胞器中选择的内参也不同4内参的选择需要考虑试验处理条件对于内参表达的影响由于GAPDH是糖酵解过程中的酶所以关于糖代谢的研究如糖尿病模型不能选择GAPDH作为内参而某些细胞中缺氧也会影响GAPDH的表达此时也不可以选择GAPDH作为内参做细胞骨架相关的研究时不能选择β-actin作为内参做细胞毒性实验时TATA binding protein和Lamin B会发生变化此时不可以选择其作为内参最后是一些个人实验过程中的感悟和想法。我自己是在做肿瘤方面的课题除了做糖代谢方面最好不选择GAPDH作为内参外将肿瘤组织与正常组织相比时最好也不要选择GAPDH作为内参因为很多肿瘤组织中的GAPDH相对于正常组织是高表达的并且有文献报道GAPDH可以作为肿瘤标志物。一般情况下做全细胞和细胞质的WB实验时选择β-actin基本能满足大部分的需要。而考察细胞核样品时由于Histone H3是染色体的组成型表达组分表达相当稳定并且特别好跑可以算是细胞核内参的首选另外针对一些特定的内参蛋白上样量超过一定的量时出来的条带可能不会有显著的差别。以前看过一篇文献讲的应该是β-actin当上样量超过20 μg时条带灰度不会呈线性的增加。因此在做WB校正时调节合适的上样量也是影响实验成功较大的一个因素。原文发表于 Island Academic Express一群来自PKU和CPU的学术快递员说人话不正经文献安利技能输出吃鸡日常生物狗和你鸟鸟天记得来玩噢~
